一、厌氧罐法

　　1.厌氧罐体的结构

　　目前使用的厌氧罐的罐体采用透明聚碳酸酯硬质塑料或不锈钢制成。圆形罐盖的周边凹槽内嵌有橡皮圈，能使罐体和盖密封。罐体与罐盖之间有一个大的金属螺旋夹，可使罐体密闭。罐体内盖的正中下方，有个金属丝网盒或金属盘，用于放催化剂。

　　2.厌氧罐的原理

　　用物理或化学的方法把密闭容器中的氧除去，制造一个无氧环境。常用的方法是油气换气法和气体发生袋法。

　　抽气换气法：先把需厌氧培养的平板或液体瓶放入真空厌氧缸或厌氧罐中，再放入钯粒催化剂(可使罐中的氧与氢反应生成水，除去氧)和美蓝指示剂(缸中有氧时，指示剂为蓝色，缸中无氧时，指示剂变无色),然后利用真空泵对真空厌氧缸或厌氧罐抽真空，再反复充入无氧的氮气3次，后充入80%的氮气、10%的氢气和10%二氧化碳的混合气体。钯粒能够促使混合气体中氧反应掉，美蓝指示剂显示无色，则厌氧环境形成。钯粒催化剂用过后，经干热2h后可重复使用。打开观察培养物后需重新抽气换气。

　　该法利用化学方法造成无氧环境，简便易行。该方法是在厌氧罐中放一个氢气、二氧化碳气体发生袋、催化剂、美蓝指示剂。在钯粒催化剂的作用下，罐中的氧气和氢气反应生成水，从而造成罐内的无氧环境。气体发生袋是由一丸朋氢化钠氯化钴合剂、一丸碳酸氢钠柠檬酸合剂及一片滤纸条组成。使用时剪去部分的一角，加入10 mL水，水沿滤纸渗到两个试剂丸上，发生反应，产生氢气和二氧化碳。

　　使用时，加水后应立即放入罐中并密闭，即可厌氧培养。

　　二、厌氧袋法

　　厌氧袋是一种无毒、透明不透气的复合塑料薄膜袋。袋中装有产生氢气和二氧化碳的安剖瓶1只，已还原成无色的美蓝指示剂安剖瓶1只和钯催化剂。使用时，把需培养的平皿放入厌氧袋中，用弹簧夹夹紧袋口，呈密闭状态，先折断气体发生安瓿瓶，反应结束后(0.5 h左右),再折断美蓝指示剂安瓿瓶，若指示剂不显色，则可进行培养。

　　厌氧培养箱的使用注意事项：

　　1.仪器尽可能地安装于空气清净、温度变化较小的地方；

　　2.开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的使用说明，掌握正确使用方法；

　　3.培养物放入必须是在操作室内达到厌氧环境后放入；

　　4.如发生故障（停气等原因）操作室内仍可保持12小时厌氧状态（超过12小时则根据需要把培养物取出另作处理）；

　　5.经常注意气路有无漏气现象；

　　6.调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体；

　　7.真空泵按要求使用，定期检查加油。